NC轉印膜、PVDF轉印膜、正電荷尼龍轉印膜的優缺點對比
標簽： 轉印膜
| 目錄 |
| 1、什么是Western Blot 2、NC轉印膜、PVDF轉印膜、正電荷尼龍轉印膜的優缺點對比 3、邁博瑞轉印膜推薦 |
一、什么是Western Blot
就像與SDS提供的電荷結合一樣，蛋白質可以在電場中從凝膠轉移到堅固的載體上，即從凝膠中“印跡”到膜。這種方法被稱為蛋白免疫印跡轉印。
蛋白免疫印跡法中蛋白從凝膠轉印到膜上
轉膜方式主要有兩種：濕轉和半干轉。兩者原理相同，只是用于固定膠/膜疊層及施加電場的儀器有不同。半干轉耗時短，但是更適合小分子蛋白的轉印，而濕轉蛋白分子量范圍較寬，在Western Blot實驗中，常用的是濕轉。
二、NC轉印膜、PVDF轉印膜、正電荷尼龍轉印膜的優缺點對比
在蛋白質和核酸的轉移和檢測過程中，我們都常用的轉印膜有三種：正電荷尼龍轉印膜/硝酸纖維素NC轉印膜/聚偏二氟乙烯膜PVDF轉印膜。不同的轉印膜規格和參數不同。選擇正確、均一穩定的轉印膜對達到最佳的實驗結果起到關鍵性作用。
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PVDF轉印膜 |
NC轉印膜 |
正電荷尼龍轉印膜 |
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機械強度高、質地柔韌、易于保存 |
極易破碎不易操作 |
高的靈敏度和 |
在蛋白免疫印跡法中，可根據靶蛋白分子大小選擇0.2 µm或0.45 µm孔徑的膜。在大多數應用中，PVDF和硝酸纖維素是等效的。請注意，PVDF的容量高于硝酸纖維素，但需要更仔細的預處理：根據凝膠大小將膜切割成適當大小，通常比凝膠稍大一點；在甲醇中浸泡約30秒；在ddH2O中清洗約1分鐘，然后在冰冷的轉印緩沖液中孵育5分鐘。凝膠還需要在冰冷的轉印緩沖液中平衡3-5分鐘。
三、邁博瑞轉印膜推薦
MS®轉印膜主要是參與Southern印跡雜交和Northern印跡雜交實驗，用于實現基因診斷，通常都是將雜交結果轉移到印記膜上，作為最終判斷依據。印跡膜有多種形式：0.2um和0.45um的PVDF轉印膜、硝酸纖維素轉印膜、（Nylon66）尼龍轉印膜，這是一種經驗證的western 雜交介質，PVDF用于高載量免疫印跡和蛋白測序。
| 名稱 | 濕潤性 | 靈敏度和分辨率 | 背景 | 機械強度 | 溶劑耐受性 | 水潤性 | 蛋白結合能力 | 適用染色方法 | 檢測方式 |
| Nylon66印跡膜 | 親水性 | 高 | 較高 | 軟而結實 | 較差 | 緩沖溶液潤濕 | >400μg/cm2 | 不能用陰離子染料 | 不能用陰離子染料，受限制 |
| NC轉印膜 | 親水性 | 高 | 低 | 干的NC膜易脆 | 差 | 緩沖溶液潤濕，避免氣泡 | 80-110μg/cm2 | 膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁 | 常規染色，可用放射性和非放射性檢測 |
| PVDF轉印膜 | 疏水性 | 高 | 淺 | 機械強度高 | 好 | 100%的甲醇潤濕 | 125-200μg/cm2 | 膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁、考馬斯亮蘭 | 常規染色，較于NC膜可用考馬斯亮藍染色，ECL檢測和快速免疫檢測 |
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